Eficiente Transferência Lentiviral de Genes para as Células do Estroma Córneo usando um Laser "Femtosecond"

A-P Bemelmans, Y Arsenijevic and F Majo


Nós investigamos um novo procedimento para transferência de genes para o estroma (o arcabouço, geralmente tecido conjuntivo de um órgão) da córnea do porco para a entrega de fatores terapêuticos. Um espaço delimitado foi criado em 110 μm de profundidade com um laser LDV nas córneas do porco, e um vetor lentiviral derivado do HIV-1 expressando proteína verde fluorescente (GFP) (LV-CMV-GFP) foi injetado dentro desse espaço. As córneas foram subsequentemente dissecadas e colocadas em cultura como transplante para um meio artificial. Após 5 dias, as análises histológicas dos transplantes revelaram que o espaço da cavidade nas córneas tinha fechado e que o procedimento de transferência do gene foi eficiente sobre toda a área da cavidade. Quase todos os ceratócitos (célula fibroblástica do estroma da córnea) foram convertidos nessa área. A difusão do vetor no ângulo certo do plano da cavidade abrange de quatro camadas de ceratócitos (do lado do endotélio) a dez (do lado do epitélio). Após 21 dias, o nível de transdução foi similar aos resultados obtidos após 5 dias. A técnica de laser femtosecond permite uma injeção exeqüível e difusão de vetores lentivirais para converter eficientemente as células do estroma em áreas delimitadas. A apresentação da eficácia desse procedimento “in vitro” pode representar uma etapa importante na direção do tratamento ou da prevenção de angiogêses recorrentes do estroma córneo.

Fonte:
http://www.nature.com/gt/journal/v16/n7/abs/gt200941a.html