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605053 TAR RNA-BINDING PROTEIN 2; TARBP2
Alternative titles; symbols
TRBP
Gene map locus 12p12.1-q13.1
TEXT
CLONING
HIV-1, the causative agent of acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), contains an RNA genome that produces a chromosomally integrated DNA during the replicative cycle. The HIV Tat protein (see 601409), a transcription-activating protein that binds to the bulge region of a stable stem-bulge-loop structure, TAR RNA, activates the HIV-1 long terminal repeat (LTR). Tat activates the LTR less efficiently in rodent than in human cells, suggesting that cellular RNA-binding proteins are also involved in the regulation of HIV replication. By screening a HeLa cell cDNA library with a TAR RNA probe, Gatignol et al. (1991) purified a cDNA, TARBP2, encoding a 345-amino acid protein termed TRBP by the authors. Mutation analysis showed that the TARBP2 protein binds to the helix between the bulge and the loop of the TAR RNA. Functional analysis demonstrated that TARBP2 enhanced expression of the HIV-1 LTR 20- to 60-fold and that the transactivation required an intact TAR RNA structure.
O HIV1, o agente causador da síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS), contém um genoma em RNA que produz um DNA integrado no cromossomo durante o ciclo replicativo. A proteína Tat do HIV, uma proteína de ativação da transcrição que se liga à região da saliência de uma estável estrutura em laço saliente de fita, TAR RNA, ativa o LTR (longo terminal de repetição) do HIV-1. Tat ativa o LTR com menos eficiência em roedores do que em células humanas, sugerindo que proteínas celulares de ligação a RNA também são envolvidas na regulação da replicação do HIV. Através do rastreamento de uma biblioteca de cDNA de células HeLa com uma prova de TAR RNA, Gatignol ET al. (1991) purificaram um cDNA (clone de DNA), TARBP2, codificando uma proteína de 345 aminoácidos chamada TARBP2 pelos autores. Análises mutacionais demonstraram que a proteína TARBP2 intensificou a expressão do LTR DO HIV-1 de 20 para 60 cópias e que a transativação requeria uma estrutura intacta da TAR RNA.
By sequence analysis, Kozak et al. (1995) determined that human and mouse TARBP2 genes are expressed as 1.6-kb transcripts. However, immunoblot analysis revealed that TARBP2 encodes 90- and 37-kD proteins in mouse cells, a 37-kD protein in hamster cells, and a 55-kD protein in monkey and human cells.
Através de analyses de seqüências, Kozak et al. (1995) determinaram que os genes da TARBP2 humano e do camundongo expressavam transcridos como 1.6 kbytes. Entratanto, análises de imunoblot (imunoensaio) revelaram que o gene de TARBP2 codifica proteínas de 90 e 37 quilodáltons nos camundongos, uma de 37-kD nas células do hamster, e uma proteína de 55-kD nas células dos macacos e humanas.
GENE FUNCTION
Chendrimada et al. (2005) demonstrated that TRBP, which contains 3 double-stranded RNA-binding domains, is an integral component of a Dicer (606241)-containing complex. Biochemical analysis of TRBP-containing complexes revealed the association of Dicer-TRBP with Argonaute-2 (AGO2; 606229), the catalytic engine of the RNA-induced silencing complex (RISC). The physical association of Dicer-TRBP and AGO2 was confirmed after the isolation of the ternary complex using Flag-tagged AGO2 cell lines. In vitro reconstitution assays demonstrated that TRBP is required for the recruitment of AGO2 to the small interfering RNA (siRNA) bound by Dicer. Knockdown of TRBP resulted in destabilization of Dicer and a consequent loss of miRNA biogenesis. Finally, depletion of the Dicer-TRBP complex via exogenously introduced siRNAs diminished RISC-mediated reporter gene silencing. Chendrimada et al. (2005) concluded that these results support a role of the Dicer-TRBP complex not only in miRNA processing but also as a platform for RISC assembly.
Chendrimada et al. (2005) demonstraram que TRBP, a qual contém três domínios de ligação a RNA de dupla fita, é um componente integral do complexo que contém a (RNaseIII) Dicer. Análises bioquímicas dos complexos que contém TRBP revelaram a associação do ligante Dicer-TRBP com a proteína Argonaute 2 (AGO2), o motor catalítico do complexo de RNA indutor de silenciamento (RISC). A associação física de Dicer-TRBP com AGO2 foi confirmada após o isolamento dos complexos ternários usando linhagens de células com AGO2 alvejadas por marcadores. Ensaios de reconstituição “in vitro” demonstraram que a TRBP é requerida para o recrutamento de AGO2 para o pequeno RNA de interferência (siRNA) ligado por Dicer. A desagregação do TRBP resultou na desestabilização de Dicer e uma coseqüente queda na bioênese de miRNA. Finalmente, a depleção do complexo Dicer-TRBP por meio de siRNAs exógenos introduzidos reduziu o silenciamento de genes mediado por RISC. Chendrimada er al. (2005) concluíram que esses resultados fudamentam um papel do complexo Dicer-TRBP não somente no procesamento de miRNA mas também como uma plataforma para reunião do complexo RISC.
MAPPING
By analysis of somatic cell hybrids, Kozak et al. (1995) mapped the TARBP2 gene to the centromeric region of chromosome 12 (12p12.1-q13.1). Using the same method, they mapped a human TARBP2 pseudogene (TARBP2P) to 8q22-qter and the mouse Tarbp2 gene to chromosome 15.
Por análises de células somáticas híbridas, Kozak et al. (1995) mapearam o gene de TARBP2 na região centromérica do cromossomo 12 (12p12.1-q13.1). Usando o mesmo étodo eles mapearam um pseudogene humano de TARBP2 (TARBP2P) no 8q22-qter e o gene Tarbp2 no camundongo no cromossomo 15.
SEE ALSO
Gatignol et al. (1996)
Sequential steps in Tat trans-activation of HIV-1 mediated through cellular DNA, RNA, and protein binding factors.Gatignol A, Duarte M, Daviet L, Chang YN, Jeang KT.Unité 332 INSERM, Institut Cochin de Génétique Moléculaire, Paris, France.The regulation of HIV expression is controlled by the activity of the Long Terminal Repeat (LTR). Trans-activation by the virally encoded Tat protein is one of the main mechanisms of LTR activation. Tat binds to its target, TAR RNA, and cellular proteins that bind the LTR, Tat, or TAR RNA are important components of the trans-activation process. We will review the factors that have been characterized for a possible involvement in this mechanism. Whereas LTR binding proteins consist of Sp1 and TBP, a large number of factors that bind TAR RNA have been isolated. We have previously cloned two of them by RNA probe recognition: TRBP and La. We have shown that the in vitro and in vivo binding of TRBP to TAR RNA correlates with a constant expression of the protein during HIV-1 infection. Several proteins that interact with Tat have mainly positive, but some negative, effects on trans-activation. Genetic studies have defined that human chromosome 12 encodes a protein that will allow trans-activation in rodent cells. The binding and the functional data about these proteins suggest sequential steps for the Tat trans-activation mechanism. Each of these intracellular molecular events could be the target for molecular intervention against the virus.
A regulação da expressão do HIV é controlada pela atividade do Longo Terminal de Repetição (LTR). A transativação pela proteína viral codificada Tat é um dos mais importantes mecanismos de ativação do LTR. Tat liga-se a seu alvo, TAR RNA, e as proteínas celulares que ligam LTR, Tat ou TAR RNA são importantes componentes do processo de transativação. Nós revisaremos os fatores que têm sido caracterizados por um possível envolvimento neste mecanismo. Enquanto proteínas de ligação ao LTR consisem de Sp1 e TBP, um largo número de fatores que ligam TAR RNA têm sido isolados. Nós temos dois deles previamente clonados através da prova RNA de reconhecimento: TRBP e La. Nós temos demonstrado que a ligação do TRBP ao TAR RNA “in vitro” e “in vivo” são correlatos a uma constante expressão de proteínas durante a infecção por HIV-1. Várias proteínas que interagem com Tat tem efeitos positivos na transativação, mas, algumas, negativo. Estudos genétcs tem definido que o cromossomo 12 humano codifica uma proteína que permitirá a transativação em células de roedores. A ligação e os dados funcionais sobre estas proteínas sugerem passos seqüenciais para o mecanismo de transativação de Tat. Algum desses eventos moleculares poderia ser objetivo de intervenção molecular contra o vírus.