Caracterização de Metacaspases com Atividade Típica de Tripsina e Seu Suposto Papel na Morte Celular Programada no Protozoário Parasita Leishmania.

Nancy Lee, Sreenivas Gannavaram, Angamuthu Selvapandiyan, and Alain Debrabant*

RESUMO

Nessa matéria, nós caracterizamos duas metacaspases da Leishmania donovani, a metacaspase -1 (LdMC1) da L. donovani e a LdMC2. Essas duas proteínas mostram 98% de homologia entre si, e ambas contém um domínio rico em prolina no terminal carboxina. Ambos os genes são transcritos em promastigotos e amastigotos axênicos (livres de contaminação ou estéreis) de L. donovani; entretanto, a LdMC1 apresenta níveis aumentados de mRNA nos amastigotos axênicos. Um anticorpo anti LdMC foi obtido e mostrou reatividade com uma única banda de aproximadamente 42 quilo-dáltons da proteína em todas as células lisadas de ambos parasitas promastigotos e amastigotos axênicos por coloração Western. Experimentos de dilatação de fenda sugerem que as LdMCs não são sintetizadas como pró-enzimas, e estudos de imunofluorescênca mostram que as LdMCs estão associadas com os compartimentos acidocalcissomos [Acidocalcisomes são organelas ácidas redondas densas em elétrons, ricas em cálcio e polifosfato e com 100 nanometros a 200 nanômetros de diâmetro. Elas foram descobertas nos tripanossomas mas já foram encontradas no Toxoplasma gondi (toxoplasmose), Plasmódium (malária), Chlamydomonas reinhardtii (uma alga móvel com cloroplasto e flagelo), Dictyostelium discoideum (fungo), bactérias e plaquetas humanas. Wikipédia] da L. donovani. Ensaios enzimáticos de LdMCs imuno-precipitadas mostram que as LdMCs nativas clivam substratos de tripsina eficientemente e são incapazes de clivar substrataos específicos de caspases. Consistentemente, a atividade da LdMC é insensível aos inibidores de caspase e é eficientemente inibida por inibidores de tripsina, tais como leupeptina, antipaína, e TLCK. Em adição, nossos resultados mostram que a atividade da LdMC foi induzida nos parasitas tratados com peróxido de hidrogênio, um conhecido disparador da morte celular programada na Leishmania e que os parasitas que expressavam muitas metacaspases são mais sensíveis à morte celular programada induzida por peróxido de hidrogênio. Esses achados sugerem que as metacaspases da Leishmania não são responsáveis pela atividade típica de caspase relatadas neste organismo e sugere um possível papel das LdMCs como moléculas efetoras na morte celular programada das Leishmanias.

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2043384/?tool=pubmed