Duas Novas Cucurbitacinas, Neocucurbitacinas A e B, da “Buchinha do Norte” (Luffa operculata) da Medicina Popular Brasileira e Seus Efeitos na Expressão dos Genes PEBP2αA e OCIF na Linha Celular Saos-2 do Tipo Osteoblasto Humano.

[OBS.: Cucurbitacina: http://quimicanova.sbq.org.br/qn/qnol/2004/vol27n6/18-RV03188.pdf - 740 KB ]


A massa óssea é regulada coordenadamente pelas células formadoras do osso (osteoblastos) e pelas células de reabsorção do osso (osteoclastos). Usando um bio-ensaio baseado em RT-PCR com células humanas Saos-2 de tipo osteoblastos, nós estivemos procurando por químicos que podem modular a expressão do gene da proteína 2αA de ligação ao intensificador de polioma (PEBP2αA) e do fator de inibitório da osteoclastogênese (OCIF).[Obs.: As viroses Poliomas são um gênero da família Papovaviridae que inclui o vírus símio 40 e o poliomavírus, ambos os quais causam tumores em roedores em têm sido extensivamente estudados como modelos de viroses de DNA oncogênicas. O vírus do tipo polioma pode causar uma doença aguda em aves psitacinas (papagaio). O nome polioma refere-se à propriedade de produção múltiplos (poli-) tumores (-oma). http://www.answers.com/topic/polyomavirus] O (complexo) PEBP2αA/AML3/CBFA1 é um regulador de transcrição da diferenciação do osteoblasto, e camundongos eliminados (sem o gene funcionante) nos quais o gene PWNP2αA tinha sido mutado não mostraram osteogênese. OCIF/OPG é uma proteína secretada dos osteoblastos ou células do estroma e atua como um instigador para o receptor do fator de diferenciação do osteoclasto (ODF), que proporciona meios para um sinal essencial aos osteoclastos precursores para sua diferenciação em osteoclastos. Camundongos deficientes em OCIF exibem osteoporose severa. Nosso objetivo no trabalho de sondagem é obter compostos naturais que possam ser usados como provas para estudos farmacológicos na via de transdução de sinal intra-celular direcionando a expressão do gene de PEBP2αA e OCIF.

O exame de plantas medicinais da América do Sul pelo ensaio usando células Saos-2 indicou que um extrato de MeOH(metanol) da Luffa operculata (Cucurbitaceae), uma planta medicinal bienal que cresce na região da Amazônia, inibiu a expressão dos gene de ambas PEBP2αA e OCIF. A planta é conhecida comumente como Buchinha ou Bucha dos paulistas no Brasil [Obs.: Buchinha do Norte] e o extrato aquoso da fruta tem sido usado como remédio para uretrite e empiema (pus em uma cavidade corporal), e no tratamento de edema. Purificação guiada por Bio-ensaio de um extrato bruto de L. opeculata levou ao isolamento de duas novas cucurbitacinas designadas como neo-cucurbutacinas A(1) e B(2), juntamente com as cucurbitacinas B, D, E e a isocucurbitacina B. A elucidação da estrutura dos compostos acima 1 e 2 estão relatadas nesse comunicado.

O extrato de MeOH (metanol) (16,35g) do fruto da L.operculata (200g) foi dissolvido em CH2Cl2 (diclorometano). A fração solúvel de CH2Cl2 (8,52g) foi submetida a cromatografia em colunas de gel de sílica usando-se um sistema solvente de CHCl3-MeOH (50:1), seguido de cromatografia líquida de alta performance (HPLC) com CHCl3 (clorofórmio) sozinho para produzir 1 (curcubitacina A) (8 mg). Usando-se um sistema solvente CHCl3-MeOH seguido de HPLC com CHCl3-MeOH também produziu 2 (cucurbitacina B).

O composto 1, na forma de um pó menos colorido e amorfo, teve a fórmula molecular determinada como C31H42O8. O espectro em imagem de ressonância sugeriu a presença de grupos hidroxila e grupos carbonila. O espectro por H-NMR do composto 1 exibiu 40 prótons não permutáveis, incluindo nove grupos metil terciários, e quatro prótons olefínicos (olefina é alqueno). O espectro do composto 1 exibiu nove metilas, três metilenos, três metinas incluindo um carbono oxigenado, seis carbonos quaternários e quatro carbonos carbonil. O grupo metil e o grupo carbonil éster sugeriram a presença de uma metade acetóxica na molécula. Sete das 11 insaturações foram correspondentes, implicando que o composto 1 consistia de um sistema de quatro anéis.
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A exposição de células Saos-2 a 25 μM do composto 1 por seis horas resultou em um significativo decréscimo nos níveis de mRNA de PEBP2αA e de OCIF, enquanto a exposição ao composto 2 (sugerindo-se fortemente como a metade desacetil do composto 1) teve quase nenhum efeito em sua expressão. O composto 3 (cucurbitacina B) apresentou a atividade mais potente. O relacionamento estrutura-atividade das cucurbitacinas será relatado algures. A reduzida expressão de PEBP2αA e de OCIF pode levar à inibição da formação do osso e aumento da reabsorção do osso, respectivamente, resultando consequentemente na perda da densidade óssea. Nós pretendemos identificar os alvos celulares das cucurbitacinas para compreender parte do mecanismo regulador do remodelamento do osso.

PMID: 15305007

http://www.jstage.jst.go.jp/article/cpb/52/8/52_1018/_article