Exposição do Lentivírus: expressão estável de anticorpos humanos na superfície de células humanas e partículas virais.
Ran Taube, Quan Zhue, ChenXu, Felipe Diaz-Griffero e outros.

Resumo:

Base de conhecimentos:

O isolamento de anticorpos humanos usando-se tecnologias disponíveis atualmente pode ser limitado pela restrição da expressão, dobramento e modificação de proteínas após a tradução. Nós descrevemos o descobrimento de uma plataforma que utiliza vetores lentivirais auto-inativadores (SIN) para a exibição da região variável da cadeia singular de alta afinidade (scFv) de fragmentos de anticorpos na superfície de células humanas e partículas virais.

Metodologia/principais achados:

As scFvFc (porção Fc e scFv) bivalentes de anticorpos humanos foram fundidas em estruturas com diferentes metades de ancoragem transmembrana (TM) para permitir a expressão eficiente e de alto nível em células humanas e a TM ótima foi identificada. A adição de um oitavo aminoácido no motivo de incorporação da gp41 do envelope do HIV-1 suplementou a expressão aumentada do scFvFc em células humanas e a incorporação às partículas lentivirais. Ambas as células humanas expondo anticorpos e as partículas virais ligaram-se ao antígeno especificamente (obs. o antígeno é a gp41. A gp41 com um aminoácido a mais foi introduzida através das partículas lentivirais.) A sulfatização dos resíduos de tirosina nos CDR (Receptor de conjunto de diferenciação? LIR?) uma propriedade recentemente mostrada por expandir a afinidade de ligação do anticorpo e o reconhecimento do antígeno também foi demonstrada. Altos níveis de expressão do scFvFc e a integração estável foi obtida em células humanas consequentemente à transdução com IRES contendo lentivetores bicistrônicos codificadores de ZsGreen (provavelmente a proteína fluorescente verde) quando a fusão protéica scFvFc era expressada a partir do primeiro cassete (fita codificadora). Um enriquecimento de mais de 106 vezes na expressão de anticorpos nas células foi atingido com uma rodada de pré-seleção de antígeno casada com pontaria magnética seguida por seleção/distribuição FACS. Finalmente, as células exibindo scFvFc puderam ser usadas diretamente em sondagens biológicas funcionais com extraordinária sensitividade.

Conclusões:

Esta plataforma de exposição de anticorpos complementará as tecnologias existentes em virtude de proporcionarem propriedades únicas para lentiviroses e expressão de anticorpos nas células humanas, aos quais, por sua vez, podem adicionar o descobrimento de novos mAbs terapêuticos.

Fonte: Lentivirus Display: Stable Expression of Human Antibodies on the Surface of Human Cells and Virus Particles